細胞熒光染料標記檢測實驗
Zenon⑧標記技術為制備熒光標記抗體提供了一種快速、通用且可靠的實驗方法，此標記方法可利用各種熒光染料，并且起始原料可以為極少量、未純化(如雜交瘤細胞的培養(yǎng)上清液)的抗體。利用Zenon@標記技術標記的抗體適用于所有可使用直標抗體的應用領域。Zenon@ 標記技術的優(yōu)勢包括:
●10分鐘貼記時間
●每個標記1- 20微克抗體
●與BSA及其它穩(wěn)定蛋白相容
●無純化步驟.
●靈活的抗體標
Zenon⑧-標記技術如何工作
Zenon@標記技術提供一種多功能的、 易于使用的方法，用于標記人和小鼠的IgG1, lgG2a和lgG2b抗體及兔gG抗體。特殊設計的Zenon@片段只結合一 抗的Fc片段， 這種快速、非共價結合方法能夠迅速標記少量的一抗(圖1) Zenon@標記技術簡單高效;整個標記步驟只需10分鐘。
Zenon@抗體偶聯(lián)物形成后可以穩(wěn)定地儲存待用;在使用前需要添加非特異性lgG來封閉未結合的Zenon⑨片段，無需柱純化。Zenon@復 合物因而可直接應用到樣品中。
Zenon@標記技術標記的抗體與觀察到的直接標記的抗體偶聯(lián)物呈現(xiàn)相似的熒光強度或酶活性(圖2 )。
圖1. Zenon@標記技術工作原理。Zenon@抗體的非共價標記與微量標記試劑盒、 單克隆標記試劑盒、蛋白標記試劑盒的共價標記比較。
圖2. Zenon@標記技術生產(chǎn)出的標記抗體的高度相當于或者比直接標記的抗體更高。使用別藻藍蛋白(APC) 共軛標記或者使用1微克Zenon⑨APC復合物非共軛標記各種淋巴標志物抗體。然后,標記的抗
體用于人外周血淋巴細胞樣品的染色。制備Zenon@染色復臺物時，通過提高Zenon@標記技術試劑與所用一級抗體的比例可進一步提高該復合物的亮度。
Zenon@標記技術:終標記靈活性
當您需要改變標記物顏色或者檢測特定熒光是否適合您的應用或抗體時，Zenon@標記技術可提供*的標記靈活性。可廣 泛選擇的標記物、通用的標記技術，助您在流式細胞術(圖3 )和熒光成像(圖4和5 )中輕松獲得不同顏色組合成的多色應用圖像。
圖3.在流式細胞術中使用Zenon⑧標記技術。人外周血白細胞以下列三種抗體染色:預先經(jīng)Zenon⑧ Alexa Fluor@ 647小鼠IgG1標記試劑盒( Z25008)標記的抗CD3小鼠gG1抗體( A21330 )、預先經(jīng)Zenon⑨R藻紅蛋白小鼠IgG1標記試劑盒(Z25055 )標記的抗CD4小鼠gG1抗體(A21334)和預先經(jīng)Zenon⑧Alexa Fluor@488小鼠lgG2a標記試劑盒( Z25102 )標記的抗CD8小鼠lgG2a抗體(A21338 )。圖A和圖B顯示:分別區(qū)別橙色熒光信號與綠色熒光信號或者紅色熒光信號與橙色熒光信號，可以將細胞進行區(qū)分，證明Zenon@標記的抗體在同一樣品中不會互相干擾。分析樣品所用儀器及設置為: Coulter Elite流式細胞儀，針對藻紅蛋白和Alexa Fluor@488染料使用488 nm激發(fā)光，針對AlexaFluor⑧647染料使用633 nm激發(fā)光。
圖4.在熒光成像中使用Zenon@標記技術。
切取厚度為14 μm的小鼠海馬冠狀切片，應.用Zenon⑧Alexa Fluor@ 488小鼠gG1標記試劑盒( Z25002 )標記的抗a-微管伯抗體( A11126)染色。切片用NeuroTrace⑨530/615紅色熒光Nissl染料( N21482 )復染來觀察神經(jīng)元胞體，用Hoechst 33258 ( H1398，H3569,H21491 )染色來觀察細胞核。
圖5.在熒光成像中使用Zenon@標記技術。
微管蛋白和線粒體探針標記的牛肺動脈內(nèi)皮細胞微管蛋白采用Zenon@ Alexa Fluor@488小鼠lgG2b標記試劑盒( Z25202 )標記的抗a-微管蛋白小鼠IgG2b單克隆抗體檢測，線粒體采用Zenon⑨Alexa Fluor@ 555小鼠lgG2b標記試劑盒( Z25205 )標記抗氧化磷酸化酶復合體V亞單位a小鼠lgG2b單克隆抗體( A21350 )檢測。使用DAPI(D1306，D3571, D21490 )給核酸染色。
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